原兒茶酸論文


超聲波提取五味子中原兒茶酸的工藝研究

    五味子為落葉木質藤本植物，其藥材主要含有揮發性成分、木脂素類及酸性成分。有文獻報道，五味子中含有的原兒茶酸口]，能降低心肌耗氧量，拮抗腎上腺素所致的耗氧量增加，提高心肌耐氧能力，減慢心律，改善缺血中心區的乳酸和 K 的產生，顯著縮小心肌梗塞范圍 。

1 材料
1.1 主要儀器LC一2010AHT高效液相色譜儀，SPD一10A 紫外檢測器(Et本島津公司)，KQ一50型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑五味子(產地四川廣元青川)；原兒茶酸對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號：110809—200503)；甲醇為色譜純；水為三次蒸餾水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果
2.1 五味子中原兒茶酸含量的測定 2.1.1 色譜條件色譜柱：日本島津公司Shim—pack VP— ODS(150mm×4.6 mm，5.0(m)，流動相：甲醇一水一冰醋酸 (6：92.8：1.2)，流速：1.0mL／min，紫外檢測波長：295nm，柱溫：30~C。理論塔板數按原兒茶酸峰計算大約為5000，采用外標法峰面積定量，色譜圖如圖1。

2.1.2 供試品溶液的制備將五味子在60℃ 的烘箱中干燥 12小時后研細過篩，精密稱取粉碎的五味子粉末0.5g，按L1 (4 )[41正交試驗表所列進行實驗，加入乙醇，兩滴冰醋酸，稱定重量，超聲波提取后，待溶液冷卻到室溫后，再稱定重量，用相應濃度的乙醇補足減失的重量，搖勻。用0.45(m的濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液作為供試品溶液。

2.1.3 對照品溶液的制備精密稱取16.Omg原兒茶酸對照品，用甲醇定容于50mL容量瓶中，搖勻，制得320~g／mL的 原兒茶酸貯備液，取5.00mL于50mL的容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，制得32.0p,g.mL 的原兒茶酸的工作液。

2.1.4標準曲線的繪制 精密吸取原兒茶酸的工作液，置 10mL容量瓶中，用甲醇定容，分別配制成3.20，6.40，19.232.0，51.2，64.0，96.01xg／mL原兒茶酸標準液。分別自動進樣5(L，記錄色譜圖，分別測定峰面積，以原兒茶酸峰面積(s) 對進樣濃度(Ixg／mL))作線性回歸，得回歸方程為s=一1548 +9.181 X 10 (r=0.9999)，說明濃度在3.2～961~g／mL范圍內，濃度與峰面積有良好的線性關系。

2.1.5精密度試驗自動進樣32.0~g／mL原兒茶酸對照品標準液5(L，重復6次，按上述色譜條件進行測定，RSD為0. 72% ，表明儀器精密度良好。

2.1.6加樣回收率試驗精密稱取同批號藥材約0.5g，準確加入原兒茶酸對照品標準液(32.otLg／mL)2.0mL，按“2.1.3” 制備5組供試品溶液，自動進樣5 ，按樣品含量測定方法測定，計算回收率。結果，平均回收率為100.3%，RSD為1.2 % o

2.1.7樣品含量測定取待測樣品溶液，自動進樣5fzL，按照上述色譜條件下進樣測定。重復進樣3次，取平均值，根據線性回歸方程，用外標法計算樣品中原兒茶酸的含量。

2.2正交試驗設計
2.2.1 超聲波輔助正交試驗以加入乙醇濃度(A)，固液比 (B)，超聲時間(C)作為考察因素，以原兒茶酸在五味子中的含量為指標，選用L (4 )正交法進行試驗，試驗因素水平見表1。

2.2.2 正交試驗的結果及分析按照Ll (4 )正交表安排試驗，以原兒茶酸在五味子中的含量為指標，直視法分析結果詳見表2，表3。

從表2中數據直觀分析，不同因素水平綜合評分A >A >A3>AI，B4>B2>B3>Bl，C4>C2>C3>C1，4個因素的極差大小順序為R >R >R ，，固液比對原兒茶酸含量影響最大，乙醇濃度影響較小，超聲提取時間影響最小。

由表3方差分析結果可知，因素B對原兒茶酸提取有重要影響，影響因素達到顯著差異水平，因素A、C則無顯著性影響。綜合以上因素，確定最佳提取工藝為A：B4C ，即使用的乙醇濃度為40% ，固液比1：60，超聲波提取時間為50min。

2.3 驗證試驗按正交試驗結果的最佳提取工藝方案重復試驗5次，結果原兒茶酸的平均含量為0.623mg／g，RSD為1. 6%，表明該工藝重現性良好。

3 討論
五味子中原兒茶酸的最佳提取工藝參數：提取的乙醇濃度40% ，固液比l：60，超聲波輔助提取時間50min。該提取工藝穩定可靠，精密度高，操作簡便，可用于五味子中原兒茶酸 的提取和五味子的質量控制，適合于廠家的常規提取和測定應用。