原兒茶酸檢測方法
高效液相色譜法測定補血調經片中原兒茶酸的含量
補血調經片是由雞血藤、阿膠、崗稔子、肉桂、黨參等l8味中 藥組成，具有補血理氣、調經的功效，用于婦女貧血、面色萎黃、赤 白帶下、經痛、經漏、閉經等癥。其處方組成比較復雜，雞血藤為 方中君藥，其功能主治為補血，活血，通絡。用于月經不調，血虛 萎黃，麻木癱瘓，風濕痹痛。與該產品的功能主治密切相關，本實 驗以其所含有效成分之一原兒茶酸為指標，采用高效液相法測定 方中的原兒茶酸的含量。
1 儀器與試藥
島津LC一20A高效液相色譜儀；SPD—M20A二極管陣列檢 測器；島津uV一2550紫外分光光度計；Mettler PB303一N電子分 析天平(準確度：1 mg)；Mettler AE一160電子分析天平(準確： 0.1 mg；Mettler AG一135電子分析天平(準確度：0.Ol mg)； HS10260D型超聲清洗器。原兒茶酸對照品(批號：110809— 200102)由中國藥品生物制品檢定所提供，乙腈為色譜純，甲醇、 磷酸均為優級純，水為超純水。
2 方法與結果
2.1 測定波長的選擇用紫外分光光度計對對照品溶液在200 ～ 400 nm波長范圍進行掃描，結果在260 nm波長處具有最大吸 收。故選擇260 nm作為測定波長。
2.2 對照品溶液的制備精密稱取原兒茶酸對照品適量，加 50% 甲醇溶液制成每毫升含16 g的溶液，即得。
2.3 樣品提取方法的考察
2.3.1 醋酸乙酯提取法精密稱取本品2 g，加入0.2%鹽酸1ml濕潤，加入醋酸乙酯50ml，稱定重量，超聲提取(250W，40kHz)25 min，放置至室溫，加醋酸乙酯補足減失的重量，搖勻，過 濾，取濾液25ml，蒸干，殘渣加50% 甲醇溶解，定量轉移至25 mI 容量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.3.2 甲醇溶液提取法精密稱取本品2 g，加入50% 甲醇溶 液50ml，稱定重量，超聲提取(250W，40kHz)30 min，放置至室 溫，加50%甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，過濾，取濾液，即得。
結果，醋酸乙酯提取法提取產物較甲醇提取法所提的產物的 色譜峰分離清晰，用二極管陣列檢測器檢測，醋酸乙酯提取法所 提產物的峰純度高，三點法相似度在0.999以上，故采用選擇方 法醋酸乙酯提取法。
2.4 供試品溶液的制備取本品20片，除去包衣，研細，精密稱 取2 g，按“2.3.1”方法提取原兒茶酸提取液樣品。
2.5 色譜條件色譜柱為Alhima HP c (250 am×4.6 mm，5 m)；流動相為乙腈一0.2%磷酸(4：96)；柱溫40℃ ；流速0.7ml/min；測定波長260 nm。進樣量l0 l。對照品、供試品溶液與 雞血藤藥材提取液的色譜圖如圖1—3。
供試品溶液理論踏板數為14 601，結合本法具體情況，暫定 其理論板數按原兒茶酸峰計算，應不得低于5 000。
2.6 陰性對照實驗為進一步考察實驗設計的合理性，按原處 方工藝制成不含雞血藤的陰性對照樣品，按“2.5”項下方法測 定，陰性對照樣品如圖4。由圖4可以看出陰性對照色譜中，原兒茶酸峰位置無干擾峰，證明本法是合理可行的。
2.7 標準曲線的繪制取原兒茶酸對照品適量，加50% 甲醇溶 液制成16g/m的溶液。精密吸取上述溶液1，3，5，7，10 Ixl進 樣，HPLC測定。以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標繪制標準 曲線。曲線回歸方程為Y：6 368.46X一5.59(r=0.999 99)。表 明進樣量在0.016 5—0.165 g內，呈良好的線性關系。
2.8 方法學考察
2.8.1 精密度實驗取同一供試品溶液10 l，連續進樣5次。 結果見表1。結果表明，方法具良好的精密性。
2.8.2 穩定性實驗取同一供試品溶液10 l，分別在0，2.5，6， 9，12 h，照“2.5”項下方法測定峰面積，結果如表2。由表2可以 看出，峰面積RSD為0.68% ，表明峰面積變化很小，原兒茶酸在 12 h內基本穩定。
2.8.3 重復性實驗取同一供試品5份，按“2.5”項下方法獨立 測定。結果見表3。RSD為1.65% ，結果表明，本法重復性良好。
2.8.4 回收率實驗稱取5份已知含量約1 g樣品(含量：0.10 rag/片)，精密加入原兒茶酸對照品溶液(0.116 7g/m1)1ml，揮 干，按“2.5”方法測定，計算回收率，結果見表4。如表4所示，測 得的平均回收率分別為99.56% ，RSD=0.39% ，結果表明，該方 法具有很好的回收率。
2.9 樣品測定及限度要求按“2.5”項下的方法測定樣品3 批。結果見表5。如表5所示，3批樣品的平均含量為0.10 mg/ 片；按照“2.5”色譜條件測定投料用雞血藤藥材，平均含量為 0.044%?？紤]到藥材的波動及煎煮過程中的損失，暫定每片含 雞血藤以原兒茶酸(C，H O )計，不得少于0.08 mg
2.10 原料藥材的測定結果取投料用雞血藤藥材0.8 g，照正 文方法實驗。結果見表6。
3 討論
本文采用HPLC法測定補血調經片中原兒茶酸含量，本方法 簡便，準確，精密度高，重復性好，能夠有效地控制補血調經片的質量。